​活动介绍
 
2024年6月18日，博兴生物邀请安捷伦细胞分析事业部在深圳湾实验室平台部举办了2024年深圳第一场Seahorse XF 专场培训会活动，这也是在深圳办的第二场Seahorse XF 专场培训，此次活动是基于对深圳区域用户进行售后回访收集反馈信息以及综合当前Seahorse XF的使用情况而展开的，此次活动旨在给客户提供一个线下面对面沟通交流的机会，帮助客户更加全面深入的了解Seahorse XF细胞能量代谢的技术原理以及其应用领域。
 
活动现场
 
此次培训会安捷伦细胞分析应用专家林鹤鸣分享了Seahorse XF 技术的原理、应用介绍、数据分析处理及数据归一化的理论部分,最后在仪器前进行了实际操作演示。
安捷伦 Seahorse XF 技术可实时进行功能性活细胞代谢分析，更直接地测量以及更深入地了解细胞过程。Seahorse XF 技术通过测量细胞代谢驱动因素的关键指标简化数据解析，并提供试剂盒和检测等一站式解决方案，简化工作流程。进一步了解研究人员如何在疾病建模、表型分析、靶标鉴定与验证、作用机制以及先导化合物发现中利用细胞代谢能量分析。

 

 

◀合影▶

 

此次培训会吸引了约30名来自多个单位的用户老师参加，按照惯例，我们在会后进行了合影留念，此次培训会至此就告一段落了，但我们的服务远没有结束，有疑问欢迎咨询博兴生物技术支持。感谢安捷伦应用专家亲临现场为大家带来如此专业的技术培训。感谢深圳湾实验室平台提供培训场地。感谢各位老师拨冗前来参会学习。我们下期再会!!!
 
关于Seahorse数据归一化
 
问;
为什么需要数据归一化
答：
功能生物数据的归一化是原始数据展示和后续分析工作流程中的关键因素，以确保对结果的准确一致的解析。
Seahorse XF 代谢分析在这方面也是如此，实验需要进行某种形式的归一化。无论是比较不同的细胞类型、基因修饰还是化合物处理，都必须根据共同的参数将数据归一化以便正确比较。Seahorse XF 可在包括细胞数、基因组 DNA 和总细胞蛋白质的多个参数层面进行归一化。本文主要介绍使用细胞数（或细胞数的替代参数）来归一化 XF 速率数据（OCR、ECAR、PER）的方法。
01贴壁细胞数据归一化方法
通过 Cytation 采集的图像中的荧光标记细胞核来测量每孔细胞数，此方法集成了XF 技术与 Cytation 细胞成像分析仪。
XF 成像和归一化系统的典型工作流程如下：

具体请参考5994-0022ZHCN_Normalization App Note.pdf.(agilent.com.cn)
 

 

如图 1A 所示，OCR 和 ECAR 随接种密度成比例增加。完成 XF 分析后，通过 XF 成像和细胞计数软件采集荧光图像并计数，如图 1B 所示。图 1C 显示了归一化后的数据，其中将代谢速率除以软件计数得到的细胞数。在应用细胞计数归一化因子后，OCR 和 ECAR 动力学曲线都发生重叠，特别是细胞加寡霉素和 FCCP 之前的基础速率。因此，数据归一化可以鉴定与细胞密度差异相关的真实生物学变化。如图 1C 所示，FCCP 对 OCR 的影响随细胞密度而变化，而寡霉素导致的 ECAR 升高不受细胞密度影响。
02 T 细胞等悬浮细胞的归一化方法
悬浮细胞由于细胞核尺寸小，且造血来源的细胞不能有效地吸收Hoechst荧光染料，在使用进行荧光成像背景对比度较差，会影响计数的准确性。而无标记细胞成像计数技术，只有在亚汇合细胞密度下计数才可靠，而 Seahorse XF 方案通常建议需要接近完全的汇合下进行检测分析，因此通过荧光成像或无标记成像方式进行细胞计数的方法均不太适合。采用单细胞统计计数原理的流式细胞仪，来实现对悬浮细胞的计数就成为首选方法。因此，我们建议采用安捷伦的NovoCyte流式细胞仪进行活细胞计数，以达到 Seahorse XF 分析平台进行数据归一化的要求。
 
Seahorse XF与NovoCyte流式细胞仪进行数据归一化的典型工作流程如下:

 

安捷伦 NovoCyte 流式细胞仪提供了一种简单的解决方案，无需对流体系统进行复杂的校准或使用参比微球，并且样品之间的残留最少。NovoCyte使用小样品体积，提供总细胞和活细胞的准确细胞计数。该方法允许在接种前调整细胞密度，以防初始悬浮密度超出推荐范围。该工作流程还对最终悬浮液计数，该活细胞计数用于归一化接种板。
 

归一化设备推荐

 Cytation 系列成像仪

Cytation 系列细胞成像仪可提供放大倍数高达 60 倍的荧光和高对比度明场成像。XY 导轨、聚焦、曝光、图像采集和 LED 强度均为全自动设置，简便易用。BioTek 功能强大的 Gen5 软件可以无缝采集用于定量发布的数据，无需进行大量培训。温度控制在 45 °C，振荡采用标准模式，可选 CO₂/O₂ 控制和注射器。Cytation 独特的专利设计提供了定量的表型细胞图像信息和出色的定量数据。